02373     2200205   4500001002100000005001500021035002000036245016200056700005200218250003700270260000900307300003300316084001500349082001500364008003900379650009600418520159100514856004702105990001502152INLIS00000000001767520221207080237  a0010-0721002207  aProduksi dan Purifikasi Streptavidin dengan Aktivitas Pengikatan Biotin yang Lebih Tinggi /cTarigan, Simson; Sumarningsih (Balai Besar Penelitian Veteriner)  aSumarningsih (Balai Besar Penelitian Veteriner)  aJurnal Ilmu Ternak dan Veteriner  c2014  aVol. 19 (3). P.231-238, 2014  aARTVET2021  aARTVET2021221207                |          | |   4aStreptavidin, Streptomyces avidinii, Amonium Sulfat, Iminobiotin Agarose, Aktivitas Binding  aPenelitian ini bertujuan mengembangkan teknik produksi, purifikasi dan pengukuran streptavidin yang efisien dan praktis. Streptomyces avidinii mula-mula dipropagasi dalam lempeng agar kemudian sel bakteri dari agar dipindahkan kedalam media cair sintetik (4,4 ml/cm2). Setelah 7 hari diagitasi diatas rotary shaker 200 rpm/min pada suhu ruangan (?28°C), sel bakteri dipeletkan, supernatan dikonsentrasikan menjadi 1/62 volume awal dengan amonium sulfat saturasi 75%. Setelah didialisis dalam larutan amonium carbonat pH 11, suspensi protein diadsorbsikan kedalam kolom iminobiotin agarose. Protein (streptavidin) yang teradsorbsi dielusi dengan larutan sodium asetat pH 4, eluat dikonsentrasikan dengan ultrafiltrasi dan disuspensikan dalam PBS. Pengukuran aktivitas binding streptavidin dilakukan dengan ELISA kompetitif, kompetisi antara streptavidin dalam sampel yang diukur dengan konjugat HRP-streptavidin memperebutkan biotin (IgG biotinil) yang diimobilisasi pada microtitre plate. ELISA ini mempunyai limit deteksi 0,16 ?g/ml streptavidin. Metode produksi dan purifikasi yang dikembangkan dalam penelitian ini menghasilkan 160 ?g/ml pada biakan supernatan. Setelah dikonsentrasikan dengan amonium sulfat menghasilkan 4 mg/ml (recovery 69%). Hasil akhir setelah kromatografi afiniti diperoleh streptavidin dengan konsentrasi 10 mg/ml (recovery 19%) dengan kemurnian tinggi (>95%). Streptavidin yang dihasilkan terlihat dalam bentuk streptavidin dimer ketika dianalisis dengan SDS PAGE, dan memiliki aktifitas dua kali lebih tinggi dibandingkan salah satu streptavidin komersial.  ahttp://dx.doi.org/10.14334/jitv.v19i3.1086  aARTVET2021